专题脊髓性肌萎缩症SMA与基因检测
什么是SMA？
脊髓性肌萎缩症（SpinalMuscularAtrophy,SMA）是一种常染色体隐性遗传的神经肌肉病,临床特征是脊髓前角细胞变性退化、导致对称性肌无力和肌萎缩，为一种常见的运动神经元疾病，主要表现为肌肉萎缩、肌张力低、腱反射减弱、病理征阴性，目前尚无有效治疗手段。
SMA通常根据疾病严重程度与发病年龄分为三个亚型。I型患者（MIM＃）在出生时或在6个月之前开始发病，不能独自坐或走，并且通常在两年内死于呼吸功能不全。II型患者(MIM#)在6个月之后发病，可以独坐但在没有任何辅助设备帮助的情况下不能走路，并且寿命会大大减少，III型患者（MIM#)通常在1岁半后发病，可以独立的坐或走路，但在青春期或成人后一般行走能力有所退步，需要靠轮椅行动。
脊髓性肌萎缩症在人群中的携带率约为1/35-1/50左右，发病率约为1/-1/左右。
SMA与基因
目前遗传学已经确认，SMA主要与两个高度同源（是指这两个基因的序列非常相似）的基因密切相关，SMN1与SMN2，这两个基因主要通过7号外显子和8号外显子上的两个基因位点进行区分（下图来自QuYJetal,PMID:,JMolDiagn,）。
一般来说，大部分正常个体都有2份拷贝的SMN1基因与2份拷贝的SMN2基因，SMN2基因发生外显子7的跳跃，只有少量的全长SMNmRNA，所以如果某个人两份拷贝的SMN1基因都失去功能的话一定会患病，只有一份SMN1基因起作用的个体为携带者。在SMN1基因都失去功能的情况下，SMN2基因拷贝数数目，则会影响患者的发病时间与疾病严重程度。根据Feldk?tteretal.(AmJofHumGenetics,)描述，80%的I型SMA患者携带有1到2个SMN2拷贝，82%的II型SMA患者携带有3个SMN2拷贝，96%的III型SMA患者携带有3或4个SMN2拷贝。所以对于SMA患者来说，检测SMN2基因的拷贝数在一定程度上有助于评估疾病的严重性或预后。等等，你们已经发现以上内容有问题了，怎么会有4个SMN2拷贝呢？为了便于大家理解，上面提到大部分正常人的2份SMN2拷贝，由于基因所在区域的复杂性，实际上人群中SMN2拷贝数在0到4个。根据统计95%以上的SMA患者都会检测到SMN1基因外显子7和（或）外显子8纯合缺失，除此之外，还有复合杂合突变（一个等位基因缺失，另一个点突变）。
当你理解了以上内容后，还有一些比较复杂的情况，首先SMN1基因外显子7的那个独特碱基（c.C）可以由C转换为T，这样SMN1基因就变成了SMN2基因，从造成的结果上来说，这个转换与缺失的效果是一样的，但是对于患者来说就多了一个SMN2拷贝，其次，人群中有很低比例的正常人一条染色体上有2个SMN1拷贝，而另外一条染色体上为0个拷贝，这样的正常人SMN1基因型为2+0，其实也是携带者，但是目前没有切实可行的方法去区分1+1还是2+0，但是有一个位点与之高度关联，也许将来三代测序可以。当你了解了以上内容后，我们再来聊聊SMA基因检测，理想的基因检测应该达到如下效果：
1明确区分患者、携带者、正常人；
2如果为SMN1纯合缺失患者，能够检测SMN2拷贝数；
3除了检测SMN1外显子7缺失或转换外，还能检测点突变；
4可以识别SMN12+0基因型的特殊携带者；
SMA基因检测
SMA基因检测的方法有以下几类
PCR-RFLP或一代测序
首先对目标区域进行扩增，然后通过限制性内切酶或一代测序的方法来区分，如果是患者的样本，在c.位点缺失SMN1的C峰，只显示SMN2的T纯合峰，正常人或携带者应该为杂合的C/T峰图，RFLP的分析方法性价比并不高，是那时唯一可以采用的新方法，替代SSCP分析。这个方法有个缺陷，就是有酶切不彻底的隐患，但是不能区分携带者与正常人，也不能检测SMN2拷贝数，在临床上可以诊断SMN1纯合缺失的患者，其他情况只能作为初筛。
双侧双重AS-PCR
该方法是由黄尚志老师带领团队开发，利用SMN1与SMN2基因中外显子7与内含子7的2处核苷酸差别,分别设计2个等位基因特异的引物，与内对照直接在琼脂糖电泳及PAGE进行分析,获得很好的效果。由于设计的引物正反向均有与SMN1基因特异碱基结合的位点,应用两个引物对模板的选择性,增强了特异性。与酶切方法比较,诊断结果完全一致,但没有非特异扩增,避免了酶切不完全的缺点,且方法简便,易操作,适宜临床使用。
（图片来自黄尚志等，医学研究杂志）
荧光定量PCR
主要原理是通过两个多重实时荧光定量PCR反应，以单拷贝RPP40基因为内标基因，采用MGB-Taqman探针法分别对SMN1基因第7和第8外显子进行拷贝数相对定量，来判断是否发生缺失或转换。
（图来自上海五色石医学研究股份有限公司中年白癜风怎么治疗好北京看白癜风去哪家医院最好
